Определение группы крови цоликлонами

Что такое цоликлоны? Как с их помощью определить группу крови и резус-фактор

Цоликлоны – моноклинальные антитела, которые были получены из крови мышей с помощью генной инженерии и используются для определения группы крови системы АВО и резус-фактора.

Цоликлоны, в противовес стандартным сывороткам, отличаются высокой активностью и авидностью (временем наступления, а также выраженностью склеивания (реакции агглютинации).

Основные цоликлоны:

  • Анти-A,
  • Анти-B,
  • Анти-AB,
  • Анти-0 и т.д.

По цоликлонам определяют резус-фактор и группы крови.

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Методика определения групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В

Определение групп крови системы АВО реагентами цоликлон производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца; в крови, взятой без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.

Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15° до +25°С. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную (анти-А или анти-В) пипетку. Определение группы крови системы АВО производится обычными методами на белой фарфоровой или любой другой планшетке со смачиваемой поверхностью.

Высокая активность и авидность реагентов цоликлон позволяет применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На плоскость планшета или тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови.

При определении группы крови антитела и кровь смешивают стеклянной палочкой или углом предметного стекла, которые промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли. Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При этом агглютинаты можно увидеть без каких-либо приспособлений в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья.
При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация, обычно, определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минуты из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Расшифровка результатов

Спустя несколько минут после соединения реагентов можно наблюдать результаты. Полное смешивание жидкостей говорит об отсутствии реакции, а агглютинация проявляется появлением красных сгустков в прозрачном растворе. Это эритроциты, которые склеиваются между собой при контакте с несовместимыми моноклональными антителами. Далее можно расшифровать результаты по простому алгоритму:

  • 1 группа (0) — агглютинация отсутствует в обеих каплях, поскольку на эритроцитах отсутствуют агглютиногены;
  • 2 группа (А) — реакция наблюдается в первой капле с цоликлоном анти-А;
  • 3 группа (В) — во второй капле происходит склеивание эритроцитов при контакте с реагентом анти-В;
  • 4 группа (АВ) — появление красного осадка в обеих каплях.

Четвертая группа крови считается самой редкой, поэтому при появлении агглютинации в обеих лунках анализ проводится повторно. Кроме того, кровь необходимо добавить в обычный физиологический раствор, чтобы исключить вероятность опасных заболеваний. У здорового человека она никак не прореагирует с физраствором, а эритроциты не будут склеиваться.

Совместимость групп крови

Определение группы крови необходимо для того, чтобы понимать, кровь какой группы можно, а какой нельзя переливать человеку.

Если не определена группа крови, то при её переливании от одного человека (донора) другому (реципиенту) в результате взаимодействия между эритроцитами и плазмой крови донора и реципиента может произойти склеивание эритроцитов (агглютинация) и последующее их разрушение (гемолиз).

Совместимость групп крови

Совместимость групп крови

При переливании несовместимой крови развивается гемотрансфузионный шок, который может привести к смерти. Поэтому в настоящее время придерживаются правила, по которому переливается только одногруппная кровь.

Переливание цельной крови с учетом групп осуществляется только по принципу одноименной группы (для детей это правило является обязательным). Кровь донора 0 (I) группы можно переливать реципиенту 0 (I) группы, и так далее. В экстренных ситуациях, когда нет времени или возможности делать анализ, допустимо переливание крови I группы «отрицательной» реципиентам остальных групп («до выяснения»), так как 0 (I) группа крови является универсальной.

Вливание несовместимой крови по групповой и резус-фактор принадлежности вызывает у пациента агглютинацию (склеивание) собственных эритроцитов, что вызывает смерть. Если смешать две разные группы крови на стеклянной пластинке, реакция отторжения будет настолько сильной, что ее можно наблюдать невооруженным глазом: клетки одной группы будут связываться антигенами чужеродной крови.

Каждый из нас является потенциальным донором и человеком, которому необходимо переливание крови. Универсальный донор – человек с группой крови I, резус-отрицательной. Частота встречаемости составляет 6,45%.

Универсальный реципиент (кому переливают) – человек с группой крови IV, резус-положительной. Частота встречаемости составляет 5,95%.

Показания к назначению анализа:

  • Беременность (профилактика резус-конфликта);
  • Наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором;
  • Невынашивание беременности;
  • Гемолитическая болезнь новорожденных;
  • Подготовка к гемотрансфузии.

Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)

Метод определения: метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки). Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путем центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.

В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типирован-ные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

Сроки исполнения: 1 день

При обнаружении аллоиммунных антиэритроцитарных антител проводится их полуколичественное определение.
Результат выдается в титрах (максимальное разведение сыворотки, при котором еще обнаруживается положительный результат).

Единицы измерения и коэффициенты пересчета: Ед/мл

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат: Сенсибилизация к резус-антигену или другим эритроцитарным антигенам.

ГБУЗ СК «ГП № 4» г. Ставрополя
Adblock
detector